改善急性呼吸窘迫症候群技術

Immune regulation tech

2019年12月在中國武漢爆發了新型冠狀病毒感染，引起了 Coronavirus Disease 2019（COVID-19），並可能引發急性呼吸窘迫症候群（Acute Respiratory Distress Syndrome, ARDS）造成嚴重肺損傷，目前仍然無藥可醫。疫情來的如此兇猛急速，如何找出切合有針對性功能阻斷疾病發展的藥物是迫切所在。

改善血氧濃度

為了精確評估對 ARDS 肺臟損傷的效能，本研究團隊建立一個穩定的單肺損傷的動物模型。動物試驗證明能有效修復藥物 Bleomycin (BLM) 造成的肺損傷，並提升其血氧濃度。

（A）實驗動物分組、與處理流程。將 BLM打入大白鼠的左支氣管內，在傷害後一天，形成左肺損傷的大白鼠模式。之後給予食鹽水或植物萃取七天或十四天，測量大白鼠的血氧量與呼吸頻率。

（B）使用植物萃取有助肺損傷大白鼠的血氧提升。

（C）使用植物萃取，有助於減緩肺損傷大白鼠的呼吸頻率。

透過 let-7 有治療 ARDS 的潛能

我們使用 miRanda 平台預測 let-7a 和 miR148a/b 可以靶向 SARS-CoV-2 基因序列，同時 let-7a 和 miR-148 擁有最高的結合能力。因此表明提高這兩種 miRNA 的表現量會有助於抑制 SARS-CoV-2 複製。有研究報導指出，let-7 家族的表現降低與 ARDS 的病程進展相關，因此增加 let-7 的表現量可能有助於改善 ARDS 病況，同時 let-7a 的表現增加將有助於抑制 SARS-CoV-2 之複製。我們將 BEAS2B 正常肺細胞處理，實驗結果表明使用植物萃取可明顯增加 let-7a-5p表現量，所以使用植物萃取可能有助於改善 ARDS 病況。

Virofree™ 可增加 hsa-let-7a-5p 之表現

將1x106 個 BEAS2B 細胞接種在 10cm 培養皿中 24 小時，再給予 0.33 mg / ml 使用植物萃取處理 24 小時後收集樣品。以 TRIzol 試劑提取 miRNA。以 U54 作為內部對照，利用 qPCR 偵測 miRNA hsa-let-7a 的表現量。實驗測定由 Phalanx Biotech Group 所提供 Phalanx miRNA OneArray® Profiling 試劑檢驗。

抑制巨噬細胞進行鐵依賴型細胞死亡（ferroptosis）來治療 ARDS

巨噬細胞為參與第一線抵抗病毒感染的先天免疫細胞，並參與 ARDS 各個病理階段的重要免疫細胞，同時也是調節鐵離子代謝的重要角色。為降低病毒對於鐵的生物利用度，以防止在病毒在體內茁壯，巨噬細胞會將鐵儲存進細胞內。但是過多的鐵可能具有細胞毒性使細胞氧化壓力上升從而進行鐵依賴型細胞死亡（ferroptosis），讓巨噬細胞死亡使人體免疫能力受損。由此可知，了解並針對巨噬細胞可能有益於增加對 ARDS，甚至是 COVID-19 的療效。為了驗證 Virofree™ 可以有效調節巨噬細胞中鐵濃度以及氧化壓力， THP-1 巨噬細胞作為體外試驗模型。由實驗結果得知，可以藉由增加 xCT 和 GPX4 等蛋白表達增強細胞對鐵產生的氧化壓力的抗性。以上證據證明植物萃取是具有提高巨噬細胞抵抗因過多的鐵累積而產生的自由基的能力，並阻止過多鐵吸收而導致的鐵依賴型細胞死亡之潛力。

使用植物萃取處理可以增加 THP-1 巨噬細胞抗炎反應並降低轉鐵蛋白受體蛋白表現量

以西方墨點法（Western blot）分析，分別利用不同濃度的使用植物萃取處理 THP-1 巨噬細胞。處理時間分別為 0、6、24 小時。